Structural insights into the molecular basis responsible for the effects of immobilization on the kinetic parameters of glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase from Trypanosoma cruzi and human

摘要

O desenvolvimento de métodos rápidos e eficazes para a identificação de novas moléculas bioativas é fundamental para o processo de descoberta e planejamento de fármacos. A integração de um sistema de cromatografia liquida de alta eficiência (CLAE), com biorreatores como fase estacionária (IMER) é uma estratégia atrativa e versátil para a triagem de coleções de compostos visando à identificação de novos agentes terapêuticos. Os parâmetros cinéticos da enzima imobilizada gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase (GAPDH) de Trypanosoma cruzi e humana foram determinados (T. cruzi: ‘K IND. M POT. G3P’ = 0.50 mmol ‘ L POT. -1’; ‘K IND. M POT. NAD+” = 0.67 mmol ‘L POT. -1’; humana: ‘K IND. M POT. G3P’ = 3.7 mmol ‘L POT. -1’; ‘K IND. M POT. NAD+’ = 0.75 mmol ‘L POT. -1’) e comparados com aqueles observados em solução (T. cruzi: ‘K IND. M POT. G3P’ = 0.42 mmol ‘L POT. -1’; ‘K IND. M POT. NAD+’ = 0.26 mmol ‘L POT. -1’; humana: ‘K IND. M POT. G3P’ = 0.16 mmol ‘L POT. -1’; ‘K IND. M POT. NAD+” = 0.18 mmol ‘L POT. -1’). Os resultados indicaram uma diminuição na afinidade das enzimas imobilizadas, entretanto, os elementos estruturais necessários para o processo de reconhecimento molecular e atividade biológica permaneceram inalterados, aumentando a estabilidade das enzimas. Além disso, a análise estrutural forneceu dados moleculares importantes envolvidos nos efeitos da imobilização sobre as interações entre ligante e receptor e, consequentemente, sobre a atividade enzimática e parâmetros cinéticos